Paloma’s Weblog

Propuesta de investigación para el semestre:

         Siendo éste mi último semestre de investigación subgraduada, he sido asignada con un proyecto a corto plazo, dirigido o encaminado mayormente al área de microbiología de alimentos (y algo de ecología microbiana).  Hemos propuesto (mi mentor y yo), hacer algunas pruebas con alimentos selectivos, en las que verifiquemos la presencia de integrones bacterianos resistentes a antibióticos.  Para dar comienzo a ésto, hemos escogido “Yogurts” comerciales con alta cantidad de probióticos (carga microbiana para regenerar la flora intestinal) y queso de hoja hecho en Puerto Rico.  Nuestro objetivo es identificar si la resistencia a antibióticos mediada por integrones, ha ido en aumento por auto-ingestión vía oral.

o   Metas a alcanzar al final de este semestre:

                    Espero haber logrado …
§  (1)…Extraer DNA bacteriano de los comestibles comerciales seleccionados
§  (2)…Una amplificación positiva del DNA bacteriano a partir del 16S
§  (3)…Ejecución de PCR’s para detectar la presencia de integrones clínicos clase 1, 2 y 3 (una vez se haya detectado la presencia de los genes de integrasas universales por la misma técnica)
§  (4)…A partir de los resltados que se obtengan en el transcurso del semestre, estudiar algún otro alimento, o inferir conclusiones objetivas a partir de nuestras predicciones.

·         ¿Cómo se basa el trabajo de este semestre en relación al anterior?

                    El semestre pasado trabajé mayormente con muestras ambientales, a las que les hacía pruebas moleculares para detectar la presencia de integrones bacterianos clínicos.  Aunque comenzamos a trabajar con yogurts, y la búsqueda de los integrones en los mismos, tuvimos varias contaminaciones en los controles negativos, por lo que pospusimos el reinicio del proyecto para este segundo semestre.  A partir de la idea surgida, hemos re-organizado el proyecto y estamos mucho mejor preparados y enfocados para el mismo, luego de alterar algunos procedimientos y protocolos.
·         ¿Qué nuevas técnicas planifico desarrollar? 
                     En cuanto a técnicas, siguen siendo mayormente las mismas: extracciones de DNA (a partir de kits comerciales especializados para extracciones de suelo), PCR (162, Integrasas universales, Clases 1, 2 y 3 de integrones) etc.  Lo único distinto es que antes de hacer las extracciones de DNA, utilizamos “blenders” para homogenizar los alimentos en un buffer de NaCl al .85%.  A partir de esto, la solución se agita por 15 minutos a 200 rpm y luego se comienzan a hacer las extracciones regulares.